لقد أحدث المجهر الفلوري ثورة في قدرتنا على تصور ودراسة العينات البيولوجية، مما يسمح لنا بالتعمق في عالم الخلايا والجزيئات المعقد. أحد المكونات الرئيسية للمجهر الفلوري هو مصدر الضوء المستخدم لإثارة جزيئات الفلورسنت داخل العينة. على مر السنين، تم استخدام مصادر مختلفة للضوء، ولكل منها خصائصه ومزاياه الفريدة.
1. مصباح الزئبق
مصباح الزئبق عالي الضغط، الذي تتراوح قوته من 50 إلى 200 واط، مصنوع من زجاج الكوارتز وهو كروي الشكل. أنه يحتوي على كمية معينة من الزئبق في الداخل. عند تشغيله، يحدث تفريغ بين قطبين كهربائيين، مما يتسبب في تبخر الزئبق، ويزداد الضغط الداخلي في الكرة بسرعة. تستغرق هذه العملية عادة حوالي 5 إلى 15 دقيقة.
وينتج انبعاث مصباح الزئبق عالي الضغط عن تفكك واختزال جزيئات الزئبق أثناء تفريغ القطب الكهربائي، مما يؤدي إلى انبعاث الفوتونات الضوئية.
إنه ينبعث منه ضوء قوي من الأشعة فوق البنفسجية والبنفسجية الزرقاء، مما يجعله مناسبًا لمختلف المواد الفلورية المثيرة، ولهذا السبب يستخدم على نطاق واسع في الفحص المجهري الفلوري.
2. مصابيح الزينون
مصدر الضوء الأبيض الآخر الشائع الاستخدام في الفحص المجهري الفلوري هو مصباح الزينون. توفر مصابيح الزينون، مثل مصابيح الزئبق، نطاقًا واسعًا من الأطوال الموجية من الأشعة فوق البنفسجية إلى الأشعة تحت الحمراء القريبة. ومع ذلك، فهي تختلف في أطياف الإثارة الخاصة بهم.
تركز مصابيح الزئبق انبعاثها في المناطق القريبة من الأشعة فوق البنفسجية والأزرق والأخضر، مما يضمن توليد إشارات الفلورسنت الساطعة ولكن يأتي مع سمية ضوئية قوية. وبالتالي، عادة ما يتم حجز مصابيح HBO للعينات الثابتة أو التصوير الفلوري الضعيف. في المقابل، تتمتع مصادر مصابيح الزينون بمظهر إثارة أكثر سلاسة، مما يسمح بإجراء مقارنات الشدة عند أطوال موجية مختلفة. هذه الخاصية مفيدة لتطبيقات مثل قياسات تركيز أيون الكالسيوم. تظهر مصابيح الزينون أيضًا إثارة قوية في نطاق الأشعة تحت الحمراء القريب، خاصة حوالي 800-1000 نانومتر.
تتمتع مصابيح XBO بالمزايا التالية مقارنة بمصابيح HBO:
① كثافة طيفية أكثر اتساقًا
② كثافة طيفية أقوى في مناطق الأشعة تحت الحمراء والأشعة تحت الحمراء المتوسطة
③ إنتاج طاقة أكبر، مما يسهل الوصول إلى فتحة الهدف.
3. المصابيح
في السنوات الأخيرة، ظهر منافس جديد في عالم مصادر الضوء المجهري الفلوري: مصابيح LED. توفر مصابيح LED ميزة التبديل السريع بين التشغيل والإيقاف بالمللي ثانية، مما يقلل من أوقات تعرض العينة ويطيل عمر العينات الحساسة. علاوة على ذلك، يُظهر ضوء LED اضمحلالًا سريعًا ودقيقًا، مما يقلل بشكل كبير من السمية الضوئية أثناء تجارب الخلايا الحية طويلة المدى.
بالمقارنة مع مصادر الضوء الأبيض، تنبعث مصابيح LED عادةً ضمن طيف إثارة أضيق. ومع ذلك، تتوفر نطاقات LED متعددة، مما يسمح بتطبيقات مضان متعددة الألوان متعددة الاستخدامات، مما يجعل مصابيح LED خيارًا شائعًا بشكل متزايد في إعدادات الفحص المجهري الفلوري الحديثة.
4. مصدر ضوء الليزر
مصادر ضوء الليزر أحادية اللون واتجاهية للغاية، مما يجعلها مثالية للفحص المجهري عالي الدقة، بما في ذلك التقنيات فائقة الدقة مثل STED (استنفاد الانبعاثات المحفزة) وPALM (الفحص المجهري للتعريب الضوئي). عادةً ما يتم اختيار ضوء الليزر ليتناسب مع الطول الموجي المحدد للإثارة المطلوب للفلوروفور المستهدف، مما يوفر انتقائية عالية ودقة في إثارة الفلورسنت.
يعتمد اختيار مصدر ضوء المجهر الفلوري على المتطلبات التجريبية المحددة وخصائص العينة. لا تتردد في الاتصال بنا إذا كنت بحاجة إلى أي مساعدة
وقت النشر: 13 سبتمبر 2023