يعد مرشح الفلورة عنصرًا أساسيًا في المجهر الفلوري. يحتوي النظام النموذجي على ثلاثة مرشحات أساسية: مرشح الإثارة، ومرشح الانبعاثات، ومرآة مزدوجة اللون. وعادة ما يتم تعبئتها في مكعب بحيث يتم إدخال المجموعة معًا في المجهر.

كيف يعمل مرشح مضان؟
مرشح الإثارة
تنقل مرشحات الإثارة الضوء بطول موجي محدد وتحجب الأطوال الموجية الأخرى. ويمكن استخدامها لإنتاج ألوان مختلفة عن طريق ضبط المرشح للسماح بمرور لون واحد فقط. تأتي مرشحات الإثارة في نوعين رئيسيين — مرشحات التمرير الطويل ومرشحات تمرير النطاق. عادة ما يكون المثير عبارة عن مرشح تمرير نطاق يمرر فقط الأطوال الموجية التي يمتصها الفلوروفور، وبالتالي يقلل من إثارة المصادر الأخرى للتألق ويحجب ضوء الإثارة في نطاق انبعاث الفلورسنت. كما هو موضح بالخط الأزرق في الشكل، فإن ضغط الدم هو 460-495، مما يعني أنه لا يمكن أن يمر إلا من خلال مضان 460-495 نانومتر.
يتم وضعه ضمن مسار الإضاءة للمجهر الفلوري ويقوم بتصفية جميع الأطوال الموجية لمصدر الضوء باستثناء نطاق الإثارة الفلوروفور. يحدد الحد الأدنى من انتقال المرشح سطوع الصور وتألقها. يوصى بحد أدنى 40% من الإرسال لأي مرشح إثارة بحيث يكون الإرسال مثاليًا > 85%. يجب أن يكون عرض النطاق الترددي لمرشح الإثارة بالكامل ضمن نطاق إثارة الفلوروفور بحيث يكون الطول الموجي المركزي (CWL) للمرشح أقرب ما يمكن إلى ذروة الطول الموجي للإثارة للفلوروفور. تملي الكثافة البصرية لمرشح الإثارة (OD) ظلام صورة الخلفية؛ OD هو مقياس لمدى نجاح المرشح في حجب الأطوال الموجية خارج نطاق الإرسال أو عرض النطاق الترددي. يوصى بحد أدنى OD يبلغ 3.0 ولكن OD يبلغ 6.0 أو أكثر مثاليًا.

مرشح الانبعاثات
تخدم مرشحات الانبعاث غرض السماح للفلورة المرغوبة من العينة بالوصول إلى الكاشف. إنها تحجب الأطوال الموجية الأقصر ولها انتقال عالي للأطوال الموجية الأطول. ويرتبط نوع المرشح أيضاً برقم، على سبيل المثال BA510IF في الشكل (مرشح حاجز التداخل)، ويشير هذا التعيين إلى طول الموجة عند 50% من الحد الأقصى للإرسال.
تنطبق نفس التوصيات الخاصة بمرشحات الإثارة على مرشحات الانبعاثات: الحد الأدنى من الإرسال، وعرض النطاق الترددي، وOD، وCWL. يوفر مرشح الانبعاثات المزود بـ CWL المثالي والحد الأدنى من الإرسال ومجموعة OD ألمع الصور الممكنة، مع أعمق حجب ممكن، ويضمن اكتشاف إشارات الانبعاث الأضعف.
مرآة مزدوجة اللون
يتم وضع مرآة مزدوج اللون بين مرشح الإثارة ومرشح الانبعاثات بزاوية 45 درجة وتعكس إشارة الإثارة نحو الفلوروفور أثناء إرسال إشارة الانبعاث نحو الكاشف. تتميز المرشحات ثنائية اللون المثالية ومقسمات الشعاع بتحولات حادة بين الحد الأقصى للانعكاس والحد الأقصى للإرسال، مع انعكاس> 95% لعرض النطاق الترددي لمرشح الإثارة ونقل> 90% لعرض النطاق الترددي لمرشح الانبعاثات. حدد عامل التصفية مع تقاطع الطول الموجي (φ) للفلوروفور في الاعتبار، لتقليل الضوء الشارد وتعظيم نسبة الإشارة إلى الضوضاء في صورة الفلورسنت.
المرآة ثنائية اللون في هذا الشكل هي DM505، وقد سُميت بهذا الاسم لأن 505 نانومتر هو الطول الموجي عند 50% من الحد الأقصى لنقل هذه المرآة. يُظهر منحنى النقل لهذه المرآة انتقالًا عاليًا فوق 505 نانومتر، وانخفاضًا حادًا في النقل إلى اليسار بمقدار 505 نانومتر، والحد الأقصى للانعكاس على اليسار بمقدار 505 نانومتر ولكن لا يزال من الممكن أن يكون هناك بعض النقل أقل من 505 نانومتر.
ما الفرق بين مرشحات التمرير الطويل وتمرير النطاق؟
يمكن تقسيم مرشحات الإسفار إلى نوعين: تمرير طويل (LP) وتمرير نطاق (BP).
تنقل مرشحات التمرير الطويل الأطوال الموجية الطويلة وتحجب الأطوال الموجية الأقصر. الطول الموجي المقطوع هو القيمة عند 50% من ذروة الإرسال، ويتم إرسال جميع الأطوال الموجية فوق القطع بواسطة مرشحات التمرير الطويل. يتم استخدامها بشكل متكرر في المرايا ثنائية اللون ومرشحات الانبعاثات. يجب استخدام مرشحات Longpass عندما يتطلب التطبيق الحد الأقصى لجمع الانبعاثات وعندما يكون التمييز الطيفي غير مرغوب فيه أو ضروري، وهو ما ينطبق عمومًا على المسابر التي تولد نوعًا واحدًا ينبعث منه في عينات ذات مستويات منخفضة نسبيًا من التألق الذاتي في الخلفية.
تقوم مرشحات تمرير النطاق بإرسال نطاق معين من الطول الموجي فقط، وتحجب نطاقات أخرى. إنها تقلل من التداخل من خلال السماح فقط بنقل الجزء الأقوى من طيف انبعاث الفلوروفور، وتقلل من ضوضاء التألق الذاتي وبالتالي تحسين نسبة الإشارة إلى الضوضاء في عينات التألق الذاتي ذات الخلفية العالية، والتي لا يمكن لمرشحات التمرير الطويل تقديمها.
كم عدد أنواع مرشحات الفلورسنت التي يمكن لـ BestScope توفيرها؟
تتضمن بعض أنواع المرشحات الشائعة المرشحات الزرقاء والخضراء والأشعة فوق البنفسجية. كما هو مبين في الجدول.
مجموعة التصفية | مرشح الإثارة | مرآة مزدوجة اللون | مرشح الحاجز | مصباح LED الطول الموجي | طلب |
B | BP460-495 | دم505 | BA510 | 485 نانومتر | ·FITC: طريقة الأجسام المضادة الفلورية · الحمض البرتقالي: DNA، RNA · الأورامين: عصية السل ·EGFP، S657، RSGFP |
G | BP510-550 | دي إم570 | BA575 | 535 نانومتر | · رودامين، TRITC: طريقة الأجسام المضادة الفلورية · يوديد البروبيديوم: الحمض النووي · طلب تقديم العروض |
U | بي بي 330-385 | DM410 | BA420 | 365 نانومتر | · مراقبة التألق التلقائي · دابي: تلطيخ الحمض النووي · هوشيست 332528، 33342: يستخدم لتلوين الكروموسوم |
V | بي بي 400-410 | دم455 | BA460 | 405 نانومتر | · الكاتيكولامينات ·5-هيدروكسي تريبتامين · التتراسيكلين: الهيكل العظمي، الأسنان |
R | BP620-650 | دي إم660 | BA670-750 | 640 نانومتر | ·Cy5 ·أليكسا فلور 633، أليكسا فلور 647 |
تم تصميم مجموعات المرشحات المستخدمة في عمليات الاستحواذ الفلورية حول الأطوال الموجية الرئيسية المستخدمة في تطبيقات الفلورسنت، والتي تعتمد على الفلوريات الأكثر استخدامًا. لهذا السبب، تم تسميتها أيضًا على اسم الفلوروفور المخصص للتصوير، مثل مكعبات المرشح DAPI (الأزرق)، FITC (الأخضر) أو TRITC (الأحمر).
مجموعة التصفية | مرشح الإثارة | مرآة مزدوجة اللون | مرشح الحاجز | مصباح LED الطول الموجي |
FITC | BP460-495 | دم505 | BA510-550 | 485 نانومتر |
دابي | BP360-390 | دم415 | BA435-485 | 365 نانومتر |
تريتك | BP528-553 | دم565 | BA578-633 | 535 نانومتر |
FL-اورامين | بي بي 470 | دم480 | BA485 | 450 نانومتر |
تكساس الأحمر | BP540-580 | دم595 | BA600-660 | 560 نانومتر |
mCherry | BP542-582 | دم593 | BA605-675 | 560 نانومتر |

كيف تختار مرشح الفلورسنت؟
1. مبدأ اختيار مرشح الفلورة هو السماح للضوء الفلوري / الانبعاث بالمرور عبر نهاية التصوير إلى أقصى حد ممكن، وحجب ضوء الإثارة تمامًا في نفس الوقت، وذلك للحصول على أعلى نسبة إشارة إلى ضوضاء. خاصة بالنسبة لتطبيق الإثارة متعددة الفوتون ومجهر الانعكاس الداخلي الكلي، فإن الضوضاء الضعيفة ستتسبب أيضًا في تداخل كبير مع تأثير التصوير، وبالتالي فإن متطلبات نسبة الإشارة إلى الضوضاء أعلى.
2. تعرف على طيف الإثارة والانبعاث للفلوروفور. لإنشاء مجموعة مرشحات مضان تولد صورة عالية الجودة وعالية التباين بخلفية سوداء، يجب أن تحقق مرشحات الإثارة والانبعاث إرسالًا عاليًا مع الحد الأدنى من تموج نطاق التمرير عبر المناطق التي تتوافق مع قمم أو انبعاثات إثارة الفلوروفور.
3. ضع في اعتبارك متانة مرشحات الفلورسنت. يجب أن تكون هذه المرشحات منيعة لمصادر الضوء المكثفة التي تولد ضوء الأشعة فوق البنفسجية الذي يمكن أن يؤدي إلى "الاحتراق"، وخاصة مرشح المثير لأنه يتعرض للكثافة الكاملة لمصدر الإضاءة.
صور عينة الفلورسنت المختلفة


يتم جمع الموارد وتنظيمها على الإنترنت، وتستخدم فقط للتعلم والتواصل. في حالة وجود أي انتهاك، يرجى الاتصال بنا لحذفه.
وقت النشر: 09 ديسمبر 2022